2022-128
原代培養的細胞，來源于胚胎、組織器官和外周血，通過特殊的分離方法制備，稱為原代細胞。初步分離得到的細胞具有與體內細胞相似的生物學特性，是研究生進行與物體相關的生命活動的理想材料。原代細胞分離培養是從體內取出人/小鼠模型動物特異性細胞，用胰蛋白酶和螯合劑(EDTA)處理，分散成單細胞，并在合適的培養基中培養，使得細胞能夠存活、生長和繁殖的過程。原代培養是指細胞、組織和器官直接從體內取出后立即進行培養。此時的細胞保持了原細胞的基本性質，如果是正常細胞，則仍保留二倍體數。但實際上，...
查看更多2022-119
成纖維細胞比心肌細胞更容易貼壁，具有分裂增殖能力。差異貼壁后，原代心肌細胞間中仍有少數成纖維細胞混雜，如果處理不當，很容易長成優勢細胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細胞有絲分裂，因此BrdU常規用于抑制成纖維細胞的生長。但如果用胎牛血清培養細胞，由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子，BrdU很難抑制成纖維細胞的生長。使用小牛血清可以克服這種現象，獲得90%以上的心肌細胞。觀察原代心肌細胞間形態時，接種密度低，貼壁心肌細胞數量減少。為了防止存活的心肌細胞隨著液體的更換而被丟棄，...
查看更多2022-1012
細胞外泌體是細胞分泌的大小約為30-150nm的納米物質，是細胞外囊泡的一類，結構類似于細胞，磷脂雙分子層表面具有多種特異性膜蛋白，內部搭載著多種蛋白質、RNA、DNA等重要生物信號物質，廣泛分布于血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁、膽汁等各種體液中。外泌體的來源細胞種類非常豐富，幾乎在人體血液、尿液、母乳和唾液等多種體液中都能發現它的蹤跡?？蓚鬟f包括DNA、RNA、miRNA、脂質和蛋白質在內的多種生物活性物質，同時保護包裹的內含物免受核酸酶和蛋白酶，以及外界壞境變化引起的降解...
查看更多2022-919
CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。CCK-8&MTT方法比較方法優點缺點CCK-8法靈敏度高、不使用有機溶劑、檢測迅速、重復性好價格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養基顏色接近，容易漏加或多加MTT法價格便宜操作步驟較多，需要使用有機試劑，靈敏度不如CCK-8，多數需要配制，檢測時間長，細胞毒性較高一、原理：CCK-8是MTT的升級產品，其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧...
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一、材料與儀器：大鼠、裂解緩沖液、濃蔗糖溶液、超速離心機、組織研磨器二、實驗步驟：1.配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液（PMSF在使用前添加），冰上放置。裂解緩沖液:①0.25mol/L蔗糖網織紅細胞標準緩沖液（RSB）②0.25mol/L蔗糖（超級純）③10mmol/Tris-HCl(pH7.4)④10mmol/LNaCl⑤3mmol/LMgCl2⑥1mmol/LDTT⑦0.5mmol/LPMSF(用前從溶于乙醇的100mmol/L貯存液中添加）濃蔗糖溶液:①2mol/L蔗糖RS...
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材料與儀器：細胞、TBS抽提緩沖液、離心管實驗步驟：步驟1：根據樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟1進行操作。(1)細胞樣品①單層培養的細胞以用冰預冷的TBS將單層細胞洗滌2次，用刮棒把細胞刮入約0.5ml的TBS中，將細胞懸液轉移到冰浴的離心管中，用1mlTBS沖洗培養皿，并入離心管中的細胞懸液。于4℃以1500g離心10分鐘以收獲細胞。用5~10倍體積經冰預冷的TBS重懸細胞并再度離心。用TE(pH8.0）重懸細胞，使細胞密度為5x107細胞/ml，轉移至一個三角燒瓶中...
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2022-89
細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。原代培養物經傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限，可稱為有限細胞系，如可以連續培養，則稱為連續細胞系，培養50代以上并無限培養下去。所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講，可培養到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間...
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